sense
常識篇
“方法驗證”與“方法確認”的區(qū)別
壹
因最新版CNAS-CL01：2018《檢測和校準實驗室能力認可準則》將方法證實的名稱更改為方法驗證，下面我們以方法驗證來代替方法證實。 方法確認是對非標準方法，實驗室制定的方法，超出預(yù)定范圍使用的標準方法或其它修改的標準方法確認能否合理，合法使用的過程。 方法驗證是指在標準方法或者非標方法在引入實驗室使用前，對實驗室從人、機、料、法、環(huán)、測等方面評定其是否有能力在滿足方法要求的情況下開展檢測校準活動的過程。 一，對象不同 1.方法確認的對象是：非標方法，包括部分非標準方法，實驗室制定的方法，超出預(yù)定范圍使用的標準方法，其它修改的標準方法。 2.方法驗證的對象是：標準方法和經(jīng)過確認的非標方法。 二，目的不同 1.方法確認的目的是：確認該非標準方法能否合理、合法使用。 2. 方法驗證的目的是：驗證實驗室是否有能力按方法要求開展檢測/校準活動。 3.要了解二者的差別，首先要了解其定義。 方法驗證 英文標準中稱為“verification”，可譯為“證實”或“驗證”。在實驗室工作中，其定義為“提供客觀證據(jù)，證明某項目滿足規(guī)定要求”。 方法確認 英文標準中稱為“validation”，可譯為“確認”。其定義為“通過提供客觀證據(jù)，對特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求，得到滿足的認定?！?/p> 二者從定義上很相似，在實際操作中，驗證或確認參數(shù)也都需要從檢出限、定量限、靈敏度、選擇性、線性范圍、測量范圍等參數(shù)進行評估。 這樣看來，方法驗證和方法確認從技術(shù)層面上殊途同歸，但實際上，二者卻有著本質(zhì)上的區(qū)別。其中最關(guān)鍵的區(qū)別，在于方法確認與方法驗證的對象是不同的。 方法驗證，是針對標準方法進行的。 “17025”中規(guī)定，在引入檢測或校準之前，實驗室應(yīng)證實能夠正確地運用這些標準方法。標準方法是指由公認機構(gòu)經(jīng)過評價確認后向社會公開發(fā)布的技術(shù)規(guī)范文件。實驗室在使用標準方法之前，應(yīng)經(jīng)過方法驗證，或稱之為方法證實，即實驗室在使用標準方法進行檢測前需要證實實驗室使用標準方法的技術(shù)能力是否達到了標準的規(guī)定要求。 方法確認，主要針對非標方法。 其對象在“17025”標準中有所規(guī)定。從廣義的理解來看，除了國際、區(qū)域、國家、行業(yè)、地方標準所規(guī)定方法以外的檢測方法都屬于非標準方法，除了第一類的方法屬于標準方法，其他三類都屬于非標準方法。 當(dāng)實驗室采用的檢測方法為非標準方法時，就要對非標準方法進行確認，針對非標準方法的不同類型，進行區(qū)分來加以討論。 01 已獲得政府或認可機構(gòu)承認的非標準方法 國家相關(guān)主管或行業(yè)主管部門發(fā)布的技術(shù)方法，此類方法雖不是標準方法，但因其已得到權(quán)威機構(gòu)承認，故可直接使用，不需要再進行確認，但在投入使用前實驗室需進行證實以確保實驗室具備實施這些方法的能力。 02 知名技術(shù)組織或有關(guān)科學(xué)書籍和期刊公布的方法 知名技術(shù)組織如國際上普遍采用、行業(yè)廣泛認可的某些公司，行業(yè)協(xié)會，它們的標準除某些特定的行業(yè)需要得到行業(yè)主管部門的承認以防與主管部門的規(guī)定不一致外，實驗室也可以直接進行能力證實后使用。 03 設(shè)備制造商制定的方法 實驗室在采用由設(shè)備制造商制定的方法時，要根據(jù)檢測樣品的類型進行判斷，如果試驗樣品屬于儀器設(shè)備方法規(guī)定的種類并取值在儀器測量的范圍內(nèi)，則實驗室可直接證實后使用該方法，否則實驗室同樣要進行方法的確認，進行技術(shù)確認并制定成文件。 04 實驗室自己設(shè)計制定的方法或超出預(yù)定范圍使用的標準方法、擴充和修改過的標準方法 實驗室自制的方法必須經(jīng)過技術(shù)確認，確認可以由業(yè)內(nèi)專家進行，并提供由權(quán)威技術(shù)機構(gòu)出具該方法準確可靠的證明材料。如果實驗室自身為行業(yè)內(nèi)的權(quán)威機構(gòu)，則可由實驗室自己組織技術(shù)確認，必要時可提供外部證明材料。 方法驗證總體原則 貳 在化學(xué)分析實驗室引入標準方法時，實驗室應(yīng)根據(jù)定量分析和定性分析所述，驗證操作該方法是否滿足標準的要求，即證實（注意講的是證實）該方法能在該實驗室現(xiàn)有的設(shè)施設(shè)備、人員、環(huán)境等條件下獲得令人滿意的結(jié)果，必要時可參加能力驗證或進行實驗室間比對。 如果只是對標準方法稍加修改（只要改了就要做），如使用不同制造商的同類設(shè)備或試劑等，必要時也應(yīng)進行驗證，以證明能夠獲得滿意的結(jié)果，并將其修改內(nèi)容制訂成作業(yè)指導(dǎo)文件。 定量分析方法驗證 方法驗證過程中關(guān)鍵的參數(shù)應(yīng)取決于方法的特性和可能測到的樣品基質(zhì)的檢測范圍，至少應(yīng)測定正確度和精密度。對于痕量化學(xué)分析實驗室，實驗室還應(yīng)確保獲得適當(dāng)?shù)腖OD和LOQ。通常情況下定量分析方法驗證的參數(shù)選擇可參考下表。 定性分析定性方法驗證 分析的精密度通常表示為假陽性或假陰性率，其可以用不同的濃度水平來確定。 實驗室進行方法驗證可分析一組陰性或陽性加強樣品。如對每個不同的樣品基質(zhì)，兩個重復(fù)樣品在三個含量水平上加以分析。 建議的含量水平為空白(無分析物)、低濃度(接近方法的最低適用濃度)和高濃度(接近方法的最高適用濃度)，可用標準加入法得到適當(dāng)?shù)臐舛龋?按照同一個方法實施檢測時，將測試樣品分成兩個或更多部分。一部分進行常規(guī)分析，其他部分在分析前加入已知量的標準分析物。 加入的標準分析物的量應(yīng)是樣品中分析物估計含量的2倍一5倍，也可以是按照方法定量限、容許限等推算的標準分析物的量。 標準添加法可用于衡量方法回收率，其可能受測定樣品中分析物的含量和基質(zhì)等因素影響，也可用于評估在定量限、容許限等水平上的正確度。假陽性或假陰性率應(yīng)與方法確認的數(shù)據(jù)相當(dāng)，才能證明實驗室有能力使用該方法。 通常情況下定性分析方法驗證的參數(shù)選擇可參考上表。 實驗室如何做方法驗證？ 叁 實驗室方法驗證的一般要求： 1、標準編制組應(yīng)編制方法驗證方案，根據(jù)影響方法的精密度和準確度的主要因素和數(shù)理統(tǒng)計學(xué)的要求，選擇合適的實驗室、樣品類型、含量水平、分析人員、分析設(shè)備、分析時間等內(nèi)容。 2、標準編制組除可以使用有證標準物質(zhì)/標準樣品外，還應(yīng)提供實際樣品進行方法驗證，實際樣品應(yīng)盡量覆蓋方法標準的適用范圍。 3、在方法驗證前，參加驗證的操作人員應(yīng)熟悉和掌握方法原理、操作步驟及流程，必要時應(yīng)接受培訓(xùn)。 4、方法驗證過程中所用的試劑和材料、儀器和設(shè)備及分析步驟應(yīng)符合方法相關(guān)要求。 5、參加驗證的操作人員及標準編制組應(yīng)按照要求如實填寫《方法驗證報告》中的“原始測試數(shù)據(jù)表”，若有必要，應(yīng)附上與該原始測試數(shù)據(jù)表內(nèi)容相符的圖譜或其他由儀器產(chǎn)生的記錄打印條等。 6、標準編制組根據(jù)方法驗證數(shù)據(jù)及統(tǒng)計、分析、評估結(jié)果，最終形成《方法驗證報告》。 方法確認的方法有6種： 1、使用參考標準或標準物質(zhì)進行校準或評估偏倚和精密度。 2、對影響結(jié)果的因素進行系統(tǒng)性的評審。 3、通過改變控制參數(shù)檢驗方法的穩(wěn)健性，如恒溫箱溫度，加樣體積等。 4、與其它已確認的方法進行結(jié)果比對。 5、實驗室間比對。 6、根據(jù)對方法原理的理解和抽樣或檢測方法的實踐經(jīng)驗評定結(jié)果的測量結(jié)果不確定度。 方法驗證的方法應(yīng)包含以下幾個方面： 1、對執(zhí)行新方法所需的人力資源的評價，即檢測/校準人員是否具備所需的技能及能力，必要時應(yīng)進行人員培訓(xùn)，經(jīng)考核后上崗。 2、對現(xiàn)有設(shè)備適用性的評價，是否要補充新的的標準器或標準物質(zhì)。 3、對物品制備，包括前處理、存放等各環(huán)節(jié)是否滿足新方法要求的評價。 4、對操作規(guī)范、不確定度，原始記錄、報告格式及其內(nèi)容是否適應(yīng)新方法要求的評價。 5、對設(shè)施和環(huán)境條件的評價，必要時進行驗證。 6、對新方法正確運用的評價，當(dāng)有舊方法變更時，應(yīng)對新舊方法進行比較，尤其是差異分析與比對的評價。 7、按新方法要求進行兩次以上完整模擬檢測/校準，出具兩份完整結(jié)果報告。 注意： 1. 方法確認應(yīng)有文件規(guī)定和相應(yīng)記錄，當(dāng)修改已經(jīng)確認過的方法時，應(yīng)確定這些修改的影響，如果影響到原有的確認，應(yīng)重新進行確認。 2. 方法驗證應(yīng)有文件規(guī)定和相應(yīng)記錄，當(dāng)方法變化后，應(yīng)重新進行驗證。 實驗室方法驗證的具體要求 1、檢出限的驗證 確定檢出限，按方法操作步驟及流程進行分析操作，計算結(jié)果的平均值、標準偏差、相對標準偏差、檢出限等各項參數(shù)。最終的方法檢出限為各驗證實驗室所得數(shù)據(jù)的最高值。 2、精密度的驗證 有證標準物質(zhì)/標準樣品的測定：采用高、中、低 3 種不同含量水平(應(yīng)包括一個在測定下限附近的濃度或含量)的統(tǒng)一樣品，每個樣品平行測定 6 次以上，分別計算不同濃度或含量樣品的平均值、標準偏差、相對標準偏差等各項參數(shù)。 實際樣品的測定：各驗證實驗室應(yīng)對 1 ～3 個含量水平的同類型樣品進行分析測試，按每個樣品平行測定 6 次以上，分別計算不同樣品的平均值、標準偏差、相對標準偏差等各項參數(shù)。 對各驗證實驗室的數(shù)據(jù)進行匯總統(tǒng)計分析，計算實驗室間相對標準偏差、重復(fù)性限r(nóng)和再現(xiàn)性限R。 3、準確度的驗證 若各驗證實驗室使用有證標準物質(zhì)/標準樣品進行分析測定確定準確度，則需對 1 ～ 3個不同含量水平的有證標準物質(zhì)/標準樣品進行測定，按全程序每個有證標準物質(zhì)/標準樣品平行測定 6 次以上，分別計算不同濃度或含量水平有證標準物質(zhì)/標準樣品的平均值、標準偏差、相對誤差等各項參數(shù)。 若實驗室對實際樣品進行加標分析測定確定準確度，則需對每個樣品類型的1 ～ 3 個不同含量水平的統(tǒng)一樣品中分別加入一定量的有證標準物質(zhì)/標準樣品進行測定， 每個加標樣品平行測定 6 次以上，分別計算每個統(tǒng)一樣品的加標回收率。 對各驗證實驗室的數(shù)據(jù)進行匯總統(tǒng)計分析，計算其相對誤差或加標回收率的均值及變動范圍。
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