technology
技術(shù)篇
★ 無(wú)菌接種操作★
培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過(guò)滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無(wú)菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上，這個(gè)過(guò)程叫做無(wú)菌接種操作。
在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中的各種接種必須是無(wú)菌操作。
★ 微生物檢驗(yàn)過(guò)程中的無(wú)菌操作要求★
(1)在操作中不應(yīng)有大幅度或快速的動(dòng)作；
(2)使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放；
(3)在正火焰上方操作；
(4)接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌；
(5)在接種培養(yǎng)物時(shí)，協(xié)作應(yīng)輕、準(zhǔn)；
(6)不能用嘴直接吸吹吸管；
(7)帶有菌液的吸管、玻片等器材應(yīng)及時(shí)置于盛有5%來(lái)蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒。
★ 常用的接種方法★
斜面接種
1、在肉膏蛋白胨斜面試管上，用記號(hào)筆寫(xiě)上將接種的菌名、日期和接種者。
2、點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈。
3、將菌種試管和待接種的斜面試管，用大拇指和食指、中指、無(wú)名指握在左手中，并將中指夾在兩試管之間，使斜面向上，成水平狀態(tài)，在火焰邊用右手松動(dòng)試管塞，以利于接種時(shí)拔出。
4、右手拿接種環(huán)通過(guò)火焰燒灼滅菌（參照實(shí)驗(yàn)一），在火焰邊用右手的手掌邊緣和小指，小指和無(wú)名指分別夾持棉塞（或試管帽），將其取出，并迅速燒灼管口。
5、將滅菌的接種環(huán)伸入菌種試管內(nèi)，先將環(huán)接觸試管內(nèi)壁或未長(zhǎng)菌的培養(yǎng)基，達(dá)到冷卻的目的，然后再挑取少許菌苔。將接種環(huán)退出菌種試管，迅速伸入待接種的斜面試管，用環(huán)在斜面上自試管底部向上端輕輕地劃直線(xiàn)，勿將培養(yǎng)基劃破，也不要使環(huán)接觸管壁或管口。
6、接種環(huán)退出斜面試管，再用火焰燒管口，并在火焰邊將試管塞塞上。將接種環(huán)逐漸接近火焰，再燒灼。如果接種環(huán)上沾的菌體較多時(shí)，應(yīng)先將環(huán)在火焰邊烤干，然后燒灼，以免未燒死的菌種飛濺出污染環(huán)境，接種病原菌時(shí)更要注意此點(diǎn)。
斜面接種示意圖
劃線(xiàn)接種
劃線(xiàn)接種可使混合的細(xì)菌呈單個(gè)分散生長(zhǎng)，形成單個(gè)菌落，以便獲得純菌、活菌計(jì)數(shù)。
接種示意圖
A斜線(xiàn)法：用接種環(huán)以無(wú)菌操作挑取菌懸液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線(xiàn)3-4條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿70°角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過(guò)第一次劃線(xiàn)部分作第二次平行劃線(xiàn)，再用同法通過(guò)第二次平行劃線(xiàn)部分作第三次平行劃線(xiàn)和第四次平行劃線(xiàn)。
B曲線(xiàn)法：將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線(xiàn)。
液體培養(yǎng)基接種
向肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種少量菌體時(shí)，其操作步驟基本與斜面接種時(shí)相同，不同之處是挑取菌體的接種環(huán)放入液體培養(yǎng)基后，應(yīng)在液體表面處的管內(nèi)壁上輕輕磨擦，使菌體從環(huán)上脫落，混進(jìn)液體培養(yǎng)基，塞好試管塞后，搖動(dòng)液體，使菌體在液體中分布均勻，或用試管振蕩器混勻。
向液體培養(yǎng)基中接種量大或要求定量接種時(shí)，可將無(wú)菌水或液體培養(yǎng)基注入菌種試管，用接種環(huán)將菌苔刮下，再將菌種懸液以無(wú)菌吸管定量吸出加入，或直接倒入液體培養(yǎng)基。如果菌種為液體培養(yǎng)物，則可用無(wú)菌吸管定量吸出加入或直接倒入液體培養(yǎng)基。整個(gè)接種過(guò)程都要求無(wú)菌操作。
接種示意圖
穿刺接種
用接種針挑取菌種（針必須挺直），自培養(yǎng)基的中心垂直地刺入半固體培養(yǎng)基中，直至接近管底，但不要穿透，然后沿原穿刺線(xiàn)將針拔出，塞上試管塞，燒灼接種針。
用于厭氣性細(xì)菌培養(yǎng)、檢查細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)能力、保藏菌種。只適宜于細(xì)菌和酵母的接種培養(yǎng)。
★ 小 結(jié)★
將已接種的斜面、液體和半固體培養(yǎng)基放置28—30℃溫箱，培養(yǎng)2—3天后取出觀察結(jié)果。
上述幾種接種法的無(wú)菌操作，微生物檢驗(yàn)員均勻熟練掌握。應(yīng)在平日反復(fù)練習(xí)無(wú)菌操作接種技術(shù)，直至較熟練地掌握，如在操作中有其他問(wèn)題，可求助悟空檢測(cè)服務(wù)技術(shù)團(tuán)隊(duì)指導(dǎo)~
西安悟空檢測(cè)科技有限公司
Xi'an Wukong Testing Technology Co., Ltd.
悟空檢測(cè)
手機(jī)官網(wǎng)
悟空檢測(cè)
微信公眾號(hào)